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简答题
13.怎样测定启动子的序列?
答案解析
正确答案：答：可用足迹法。先将待测双链DNA片段(含启动子)中一条单链的一端选择性地进行末端标记,分为两组,仅在一组中添加RNA聚合酶。然后各加入恰当浓度的DNaseI,使在DNA链上随机形成缺口,经变性后电泳分离,放射自显影,即可形成以相差一个核苷酸为梯度的DNA条带。但当DNA片段与相应的序列特异性DNA结合蛋白即RNA聚合酶结合后,DNA结合蛋白可保护相应的DNA序列不受DNaseI的攻击,因而在放射自显影图谱上,DNA梯度条带在相应于DNA结合蛋白的结合区域中断,从而形成一空白区域,恰似蛋白质在DNA上留下的足迹。如果同时进行DNA化学测序,即可判断出结合区的精确顺序。
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