409.PCR实际上是重复进行DNA复制的过程,具体步骤为

本题考查的是聚合酶链式反应（PCR）的基本步骤及其顺序。 解析： PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）是一种体外扩增特定DNA片段的技术。其核心原理是模拟细胞内DNA的复制过程，在体外通过温度变化控制DNA的变性、引物结合和新链合成，从而实现目标DNA序列的指数级扩增。 PCR的一个循环包括三个连续的步骤，依次为： 1. 变性（Denaturation）：将反应体系加热至约94–98℃，使双链DNA模板解离为两条单链，以便后续引物结合。此步骤破坏氢键，打开双螺旋结构。 2. 退火（Annealing）：将温度降低至约50–65℃（取决于引物的Tm值），使特异性引物与单链DNA模板上的互补序列结合。这一过程称为退火或复性。 3. 延伸（Extension）：将温度升至约72℃（Taq DNA聚合酶的最适温度），在DNA聚合酶的作用下，以dNTP为原料，从引物的3'端开始合成新的DNA链，沿模板延伸，形成新的双链DNA。 这三个步骤构成一个PCR循环，每完成一个循环，目标DNA片段的数量理论上增加一倍。上述三个步骤必须按照“变性→退火→延伸”的顺序进行。 选项分析： - A：变性,延伸,退火 —— 错误，延伸必须在退火之后，因为需要引物先结合才能延伸。 - B：变性,退火,延伸 —— 正确，符合PCR循环的标准顺序。 - C：退火,变性,延伸 —— 错误，退火不能在变性之前，未变性的双链DNA无法让引物结合。 - D：延伸,变性,退火 —— 错误，顺序完全颠倒。 - E：延伸,退火,变性 —— 错误，起始步骤不应是延伸。 正确答案：B 核心知识点总结： PCR技术依赖于耐热的DNA聚合酶（如Taq酶）和精确的温度循环控制。每个循环包括三个步骤：变性、退火、延伸，周而复始，通常进行25–35个循环，可将特定DNA片段扩增至数百万倍。掌握这三个步骤的正确顺序是理解PCR工作原理的基础。