314.将PBMC悬液注入装有葡聚糖凝胶SephadexG-10柱中,先从柱上洗脱下来的细胞主要是

该题目考查的是免疫学实验技术中细胞分离纯化的方法，特别是利用凝胶过滤层析（分子筛层析）原理对不同类型的外周血单个核细胞（PBMC）进行初步分离的知识。 题干解析： PBMC（外周血单个核细胞）主要包括T细胞、B细胞、单核细胞和少量其他淋巴细胞。将PBMC悬液注入葡聚糖凝胶Sephadex G-10柱中，利用的是凝胶过滤层析的原理。Sephadex G-10是一种交联葡聚糖凝胶，其孔径较小，允许小分子物质进入凝胶内部孔隙，而较大颗粒则被排阻在外，从而实现按细胞大小或分子量大小进行分离。 在凝胶过滤层析中，较大的颗粒无法进入凝胶珠内部的微孔，因此它们会沿着凝胶颗粒之间的空隙流动，路径较短，洗脱速度较快，先被洗脱下来；而较小的颗粒可以进入凝胶孔内，路径更长，滞留时间更久，后被洗脱。 细胞大小比较： - T细胞、B细胞、淋巴细胞：直径约7–15 μm，属于较小的细胞。 - 单核细胞：直径约15–30 μm，是PBMC中体积最大的细胞。 - 杂质细胞：可能包括血小板聚集体或碎片，通常非常小。 然而，Sephadex G-10主要用于去除小分子杂质或血小板等极小颗粒，而不是用于区分T细胞和B细胞。更重要的是，在实际应用中，Sephadex G-10柱常用于初步去除PBMC中的血小板和小分子杂质，而较大的单核细胞和淋巴细胞则会被保留。 但本题的关键在于“先从柱上洗脱下来的细胞”。根据凝胶过滤原理，**体积较大的细胞因无法进入凝胶孔而先被洗脱**。 在PBMC中，单核细胞体积最大，理论上应最先被洗脱。但Sephadex G-10的排阻极限非常小（仅允许分子量小于约1000–1500 Da的小分子进入），实际上**细胞并不能真正进入G-10凝胶内部**，所有细胞都会被完全排阻。但由于细胞大小不同，其流体力学行为略有差异，且实际操作中发现，**淋巴细胞群（包括T细胞和B细胞）由于密度和表面特性，在G-10柱中流速较快**。 更重要的是，经典实验方法中，Sephadex G-10常用于富集淋巴细胞。因为单核细胞具有更强的粘附性，在通过凝胶柱时容易粘附在凝胶上，而**T细胞和B细胞（统称为淋巴细胞）不易粘附，更容易被洗脱**。 因此，先从柱上洗脱下来的主要是**淋巴细胞**。 选项分析： A: T细胞 —— T细胞是淋巴细胞的一部分，但并非唯一被洗脱的细胞，B细胞也会被洗脱，故不全面。 B: 单核细胞 —— 单核细胞体积虽大，但具有较强粘附性，易粘附于凝胶，不易被洗脱，通常留在柱中。 C: B细胞 —— 同样是淋巴细胞的一部分，但不是唯一被洗脱的类型。 D: PBMC中混入的杂质细胞 —— 如血小板等小颗粒，通常在上样时位于间隙流中，可能最先流出，但题目问的是“细胞”，且杂质细胞不是主要洗脱成分。 E: 淋巴细胞 —— 正确。包括T细胞和B细胞，它们非粘附性较强，在Sephadex G-10柱中不易滞留，最先被洗脱出来。 核心知识点： 1. PBMC组成：主要包括T细胞、B细胞、单核细胞和少量NK细胞。 2. Sephadex G-10的性质：为低交联度葡聚糖凝胶，孔径极小，主要用于脱盐或去除小分子杂质，但在细胞分离中可用于基于粘附性和大小的初步分离。 3. 细胞粘附性差异：单核细胞具有显著的贴壁特性，在通过凝胶柱时易被截留；而淋巴细胞不贴壁，易于通过并被洗脱。 4. 凝胶过滤层析原理：大分子或大颗粒先被洗脱，小分子后洗脱。但在细胞水平，粘附性往往比大小影响更大。 综上所述，正确答案为 E：淋巴细胞。