243.可用于尿液蛋白质定量测定的方法有( )

本题考查尿液中蛋白质定量测定的常用方法，要求掌握不同蛋白质测定方法的原理、适用范围及特点。 --- **各选项解析：** **A: 考马斯亮蓝法** 正确。考马斯亮蓝法（Coomassie Brilliant Blue method）基于考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质结合后产生颜色变化，最大吸收峰由465 nm变为595 nm，颜色深浅与蛋白质浓度成正比，可用于微量蛋白质的定量。该方法灵敏度高，适用于尿液等低蛋白样本的定量测定。因此是尿蛋白定量的常用方法之一。 **B: 紫外分光光度法** 错误。紫外分光光度法利用蛋白质在280 nm处有特征吸收峰（主要由于色氨酸和酪氨酸残基），可用于蛋白质浓度测定。但该方法易受核酸等杂质干扰，且尿液中蛋白质含量较低，280 nm处吸光度信号弱，灵敏度不足，通常不用于尿液蛋白质的常规定量测定。此外，尿液中可能存在其他干扰物质，影响检测准确性，故不推荐作为尿蛋白定量的标准方法。 **C: 磺柳酸比浊法** 正确。磺柳酸是一种酸性试剂，可使尿液中的蛋白质沉淀，形成浊度，通过比浊法测定浊度大小来反映蛋白质浓度。该方法操作简便、灵敏度较高，常用于尿液蛋白质的半定量或定量分析，尤其适用于临床筛查和动态监测。因此是尿蛋白测定的常用方法之一。 **D: 直接双缩脲法** 错误。双缩脲法是血清总蛋白测定的经典方法，其原理是蛋白质中的肽键在碱性环境中与Cu²⁺结合生成紫色络合物。但该方法灵敏度较低，需要蛋白浓度较高（通常>1 g/L），而尿液中蛋白质浓度通常较低（尤其是正常尿），难以满足检测要求。因此，直接双缩脲法不适用于尿液蛋白质的定量测定。若用于尿蛋白检测，需先浓缩处理，故“直接”双缩脲法不可行。 **E: 邻苯三酚红钼法** 正确。邻苯三酚红钼法（也称Ponceau S法或类似染料结合法）是一种基于染料与蛋白质结合后产生颜色变化的比色法。邻苯三酚红在酸性条件下与蛋白质结合，形成复合物，可在特定波长下比色测定。该方法灵敏度较高，可用于尿液中微量蛋白质的定量，属于染料结合法的一种，适用于尿蛋白检测。 --- **核心知识点讲解：** 1. **尿液蛋白质定量测定的特点：** 尿液中蛋白质含量通常较低（正常情况下<150 mg/24h），因此要求检测方法具有较高的灵敏度和抗干扰能力。常用的定量方法多为比色法或比浊法。 2. **常用尿蛋白定量方法：** - **染料结合法：** 如考马斯亮蓝法、邻苯三酚红钼法，利用染料与蛋白质结合后光吸收变化进行定量，灵敏度高，适合微量蛋白检测。 - **沉淀比浊法：** 如磺柳酸比浊法，通过酸性试剂沉淀蛋白质，测定浊度，操作简便，适用于临床常规检测。 - **免疫学方法：** 如ELISA、免疫比浊法，用于特定蛋白（如微量白蛋白）的精确定量。 3. **不适用于尿蛋白的方法：** - 双缩脲法：灵敏度低，适用于血清等高蛋白样本。 - 紫外分光光度法：易受干扰，灵敏度不足，不适合复杂基质如尿液。 --- **正确答案：A、C、E** 理由：考马斯亮蓝法、磺柳酸比浊法和邻苯三酚红钼法均具有足够灵敏度，适用于尿液中蛋白质的定量测定；而紫外分光光度法和直接双缩脲法因灵敏度不足或易受干扰，不适用于尿蛋白定量。