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简答题
42.简述化学法和双脱氧末端终止法进行DNA序列测定的原理和基本操作方法
答案解析
正确答案：答：这两种DNA序列分析的基本原理是把DNA变成在不同碱基的核苷酸处打断的四套末端标记的DNA片段。每套DNA片段打断的位置位于一种特异碱基。例如:一个具有pAATCGACT的DNA顺序,如果一个反应能使DNA在C处打断就会产生pAATC和pAATCGAC两个片段。一个能使DNA在G处打断的反应仅产生一个pAATCG片段。因此,当相应于4个不同碱基产生的四套DNA片段并排进行电泳分离时,它们产生一个可以直接读出DNA顺序的梯状区带。双脱氧末端终止法(Sanger法)应用得更广泛,因为技术上比较简单。这种方法是用酶法合成与被分析链互补的DNA链。双脱氧末端终止法1)根据DNA复制的原理,制备四套样品2)3’-位缺少羟基的核苷酸类似物ddNTP,当它们掺入合成中的核酸链时,阻止链的继续延长;3)在四组由同一模板进行的DNA多聚酶促反应中每组额外加入一种ddNTP可产生四组在不同碱基处打断的新合成核酸链,把四组合成产物在同一凝胶中电泳产生可以直接读模板顺序的电泳图。①DNA模板十引物+dNTP+ddATP②DNA模板十引物+dNTP+ddGTP③DNA模板十引物+dNTP+ddCTP④DNA模板十引物+dNTP+ddTTP
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